【微生物实验】土壤微生物的提取(放线菌&真菌)
atlas2011/05/15农业 IP:陕西
Atlas_Biotech小组 亲情奉献
本实验涉及的微生物实验操作有:培养基制备,高压蒸汽灭菌,无菌操作,超净工作台使用,平板与斜面接种,染色与镜检,培养微生物的大致分类。

主体实验思路:
一、培养基制备
1.高氏一号(培养放线菌)
2.PDA(马铃薯-葡萄糖+链霉素)-(培养真菌)
二、菌种来源
1.采集深层(10cm以下)土壤样本,无菌水稀释制备菌悬液。
三、接种
1.分梯度10-1平板划线,10-3,10-5,10-7涂布至平板。
2.适温培养
四、挑取单个菌种,扩增培养。
五、镜检分类。


一、培养基制备
1.高氏一号
可溶性淀粉 20g,KNO3 1g,K2HPO4 0.5g,MgSO4• 7H2O 0.5g,NaCl 0.5g,FeSO4• 7H2O 0.01g ,琼脂 15g,自来水 1000mL,pH 7.2~7.4
网上很多制法把琼脂加到20g甚至以上, 其实15g就已经绰绰有余,琼脂多了培养基会很硬。另外最好加热搅拌时加入可溶性淀粉,否则比较难溶解。
2.PDA
马铃薯 200g ,葡萄糖 20g,琼脂 15g, 自来水 1000ml,自然PH

煮土豆。。。
IMG_0484.jpg
IMG_0487.jpg   

包皿准备灭菌
IMG_0485.jpg


未完待续。。。
请勿插楼~谢啦
+499  科创币    hambaby    2011/05/16 农业基础科研有功……
+1  学术分    科创网    2011/05/15 嗯,w改行了。
来自:农林牧渔 / 农业
18
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~~空空如也
atlas 作者
13年0个月前 IP:未同步
294900
培养基和培养皿灭菌之后进行倒平板。
打开超净工作台的紫外灯消毒30min,之后,打开标准风速吹10Min,去除臭氧。
手和手臂使用酒精消毒,并点燃酒精灯。之后的操作尽量靠近酒精灯。
待到PDA冷却到40度不烫手时,加入少量的链霉素。并摇匀。
等待PDA冷却
IMG_0494.jpg
加入链霉素
IMG_0498.jpg
倒平板
IMG_0496.jpg

再倒高氏一号
IMG_0497.jpg
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atlas作者
13年0个月前 IP:未同步
294908
PDA和高氏一号一共倒了36个皿。
超净台的全貌还有组里的小女孩。
IMG_0522.jpg
标记皿的种类
IMG_0520.jpg

制备土壤稀释液
IMG_0517.jpg

共四个梯度  10-1用于划线,10-3;10-5;10-7用于涂布。

划线操作,不再累述,高中课本说的很清楚了,只是要多练练,小心划破培养基,当然啦,接种环的铂丝很软。
IMG_0518.jpg

涂布时使用了微量移液枪,每次涂布使用0.05ml菌液。
调整移液枪吸液量。
IMG_0519.jpg
消毒涂布器。
IMG_0531.jpg
吹出菌液
IMG_0523.jpg
快速涂布
IMG_0524.jpg
  
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atlas作者
13年0个月前 IP:未同步
294910
真菌25度,放线菌28度 恒温箱培养5天之后的结果
PDA上的结果
IMG_0566.jpg
IMG_0567.jpg
IMG_0568.jpg
IMG_0569.jpg
IMG_0570.jpg
IMG_0571.jpg

我对这个结果十分的怀疑,培养基上有的鼻涕状粘稠物必然是细菌的菌落,不知道是说明我的链霉素加的不够还是这几个细菌菌落有抗性。。。
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atlas作者
13年0个月前 IP:未同步
294912
再看高氏一号的结果
搜狗截图_2011-05-15_11-45-03.png
搜狗截图_2011-05-15_11-45-17.png
搜狗截图_2011-05-15_11-45-27.png
搜狗截图_2011-05-15_11-45-36.png
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13年0个月前 IP:未同步
294914
接下来需要将单菌落进行扩增培养,以便后续做镜检。
于是乎要进行最繁重的摆斜面操作。
搜狗截图_2011-05-15_11-49-38.png
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atlas作者
13年0个月前 IP:未同步
294920
将试管斜面再次灭菌后,摆好斜面,冷却待用。

开始做单菌落的转接操作。
挑去单菌落
IMG_0551.jpg
接种至斜面
   IMG_0553.jpg
IMG_0554.jpg

另外一侧看超净台
IMG_0556.jpg

本次试验一共转接了大约20个单菌落。(只是根据菌落形态特征进行的粗分类,故称约数)
真菌大约6种,  放线菌9中,细菌5种。
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xthxthxthxth
13年0个月前 IP:未同步
294923
哎,有钱就是好啊
给你提个建议吧,培养皿上最好不要写字尽量使用标签,写字的话影响视觉效果不说以后要是发文章这种培养皿上有字的照片貌似是不合格的,他们会让你重新拍照
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atlas作者
13年0个月前 IP:未同步
294925
当天由于时间太晚仅做了几个菌种的镜检,不够完全。较为全面的染色与镜检试验将于下周三之前补上。最近要考试啦。。。

占楼备用



   IMG_0577.jpg
IMG_0575.jpg
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13年0个月前 IP:未同步
294927
引用第7楼xthxthxthxth于2011-05-15 11:59发表的  :
哎,有钱就是好啊
给你提个建议吧,培养皿上最好不要写字尽量使用标签,写字的话影响视觉效果不说以后要是发文章这种培养皿上有字的照片貌似是不合格的,他们会让你重新拍照


本实验只是为了后续的大实验练手罢了。做斜面转接时已经使用了标签了。。。
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xthxthxthxth
13年0个月前 IP:未同步
294929
你这周有没有考试?还有你在哪个学院实验室做的?
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...
13年0个月前 IP:未同步
294936
好,这帖子才是符合科创精神知识性学习性,比起上篇虐待动物杀兔子的帖子强多了[s:222]
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atlas作者
13年0个月前 IP:未同步
294940
引用第10楼xthxthxthxth于2011-05-15 12:06发表的  :
你这周有没有考试?还有你在哪个学院实验室做的?


VB,普通生物学都要考。
我在植物保护学院的土传病害实验室做的。
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atlas作者
13年0个月前 IP:未同步
294941
引用第11楼...于2011-05-15 12:10发表的  :
好,这帖子才是符合科创精神知识性学习性,比起上篇虐待动物杀兔子的帖子强多了[s:222]

兔子、鸽子、鱼。在实验室我都杀过了。。。还扒了一整张兔子皮。。。
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13年0个月前 IP:未同步
294944
能不能制备一种能够同时应用真菌和放线菌的多种细菌培养基 ?
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atlas作者
13年0个月前 IP:未同步
294949
引用第14楼...于2011-05-15 12:18发表的  :
能不能制备一种能够同时应用真菌和放线菌的多种细菌培养基 ?


说实在的,我这个PDA培养基,估计是链霉素加少了,真菌细菌都有,放线菌仅有2株,很小,被抑制的长不起来。

但是这样有个缺点,想的到单个菌落难,并且还存在交叉感染,所以要分离菌种,必须做有针对性的培养基。
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焓熵`
13年0个月前 IP:未同步
295452
好吧~

看不到的说邪恶~~~

W看样子是要为细菌战做打算了[s:261]
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atlas作者
13年0个月前 IP:未同步
295595
引用第16楼焓熵`于2011-05-17 22:23发表的  :
好吧~

看不到的说邪恶~~~

W看样子是要为细菌战做打算了[s:261]


我实验时里面只有对植物有致病作用的细菌和病毒。还没有对动物致病的。
不过说不定我想到办法改造小麦条锈病什么,然后再散播全中国。您老人家就真的没饭吃了。
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2007/07/27注册,2年3个月前活动

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