3. rDNA-ITS序列的扩增。
典型程序
A    PCR反应体系：
10×Taq buffer                            5.0 μL
25 mmol/L MgCl2                    4.0 μL
10 mmol/L dNTP                      1.2 μL
10 μmol/L ITS1                            2.0 μL
10 μmol/L ITS4                              2.0 μL
5 U/μl Tag DNA polymerase    0.25 μL
100-200 ng/μL DNA                    2.0 μL
ddH2O                                            Up to 50 μL

B    PCR扩增反应程序：
94℃预变性         4 min

{94℃变性           30 sec
51℃退火           30 sec
72℃延伸           70 sec }
共35个循环
72℃延伸           7 min
4℃保存             ∞

4．rDNA-ITS测序与分析将扩增出来的目的核酸片段送上海生工等公司纯化后进行测序。将测得的序列提交美国NCBI的GENBANK获取对比指标靠前的20个相似序列，通过BLAST工具和DNAMAN软件进行比对分析并以Neighbor-Joining方法构建系统发育树。