9年3个月前修改于 9年3个月前IP:广东
838921
26楼
lz的转基因实验先做最单的往大肠杆菌里面转入外源质粒开始最好。我以前做过这个实验。就用DH5-阿尔法 这个菌株好些。质粒嘛要么买,要么就等其他实验室啥时候有空偷偷寄点出去就有。这个实验没有两天连续下来的很难做我做这个实验光是准备培养基,配抗生素。缓冲液试剂。就花了1天。第二天要一大早开始培养细菌。到OD 600  o.4时候开始收集细菌。然后清洗 氯化钙低温变成感受态,然后将纯化好的质粒加入转换倒进细菌里面然后再放到指定温度培养。接着需要蓝白斑筛选。或者抗生素筛选。实际上就是培养基上面涂布。然后培养。反正非常繁琐。如果再加上从克隆载体上或者文库里面的质粒中切下目的片段,再插入表达载体中,表达载体的构建,白手起家没有个1个星期一个人弄不下来完整一个实验。如果要确认质粒插入外源基因又没有插入错误还要进行测序鉴定这个过程一个载体构建下来一篇本科生毕业论文绰绰有余。虽然期刊上就300字带过实验步骤。但是没有一个月苦苦实验操作是不可能的。更加不用说还要转入植物中。土壤农杆菌介导转化这个更加复杂。后期的抗生素筛选,筛选完成后还有测序鉴定。还要各种各样的操作能一年做出来已经很厉害了。要是能长成植株一篇硕士论文都没有压力。
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我也是有底线的