【原创】PCR产物检测与纯化相关-总结
atlas 2011-10-13农业
PCR产物的检测
    凝胶电泳检测是PCR产物分析最常用最简便的方法。通过凝胶电泳检测,我们可以判断PCR扩增产物的大小。大片段泳动速度慢,小片段泳动速度快,琼脂糖凝胶电泳适于检测500bp以上的DNA 片段,聚丙烯酰胺凝胶电泳适于检测小片段DNA。
        1.琼脂糖凝胶电泳。
这是最常用的PCR产物检测方法,简便易行,仅需少量扩增产物即可检测。由于不同大小的DNA 片段具有不同的电泳速度,经溴化乙锭(EB)染色后在紫外下可发射荧光,从而确定位置。其分辨率低,但分离范围广,检出率在1-10ng。
    2.聚丙烯酰胺凝胶电泳。
        原理与琼脂糖凝胶电泳相似。具有分辨能力强,长度相差0.2%(500bp中的1bp)即可检出。装载量大,大于10ug的DNA可以载于一个标准样本槽中(1cm*1cm)而不至于影响分辨力。胶回收产物纯度高。等优势。

    其他检测方法:
1.    核酸探针杂交检测(核酸探针杂交检测法&核酸探针标记的分类)
2.    酶谱分析
3.    DNA酶免疫试验法(PCR-ELA)
4.    PCR –酶联免疫吸附法(PCR-ELISA)
5.    颜色互补分析法
6.    序列分析法
7.    PCR-HPLC法
8.    单一核苷酸引物延伸法
9.    PCR-寡核苷酸连接检测法
10.    单链构型多态性分析法

PCR产物的纯化
    常规方法:首先使用琼脂糖凝胶电泳分离反应体系中的非特异性扩增,然后使用蛋白酶K灭活Thermostable DNA Polymerase,常规的酚氯醇抽提残余dNTP,使用HPLC或凝胶电泳法除去引物及引物二聚体,再利用琼脂糖凝胶电泳-溴化乙锭染色鉴定产物纯度。
+50  科创币    zhaokenb   2011-10-13   能不能解释一下最后那个成像是啥意思啊?
来自 农业
 
2011-10-13 13:38:00
atlas(作者)
1楼
UV凝胶成像系统
US,Alpha image
114991

电泳过程。loading buffer 产生了两条条带,前蓝色为溴酚蓝,示300bp,后青色为二甲苯青,示4000bp
114992

  114993
  
114994


浸泡与EB溶液中。
114995


凝胶成像结果
114996
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2011-10-22 20:51:43
2011-10-22 20:51:43
2楼
什么MARKER?
切胶回收纯化产物要方便的多
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