【原创】制造转lux基因的大肠杆菌(E.coli TG-1 with pL1217))
atlas 2012-7-21生物学
前作:
制造转GFP荧光蛋白基因的大肠杆菌
https://www.kechuang.org/t/46051

GFP是一种发光蛋白,这种蛋白一旦合成后则会发光,且其发光的强度并不受环境,例如温度、pH等因素的影响。因此,即使在冰箱中,GFP蛋白仍能发光,除非蛋白变性才失去发光特性。但GFP发光较弱。GFP通过荧光素酶或钙活化光蛋白的能量转化过程吸收蓝光后发出强烈的绿色荧光。

相比较而言,lux基因控制一个发光的反应过程(GFP基因是一种激发荧光蛋白)。这个过程是一个酶促反应。因此,速度快、亮度大,但对反应条件敏感。例如,温度、酸度的变化都会影响其发光强度。

Lux基因的相关特性:宿主代谢活动会产生发光反应所必须的荧光素酶、底物和能量(FMNH2),甚至可以将10个菌检测出来。在实验过程中,我们可以将其进行特异性结合(根据噬菌体和宿主细胞的特异性),还可以检测活细胞。

已有研究表明,将lux基因转入大肠杆菌,大肠杆菌数与转lux基因的大肠杆菌发光强度和数量之间的关系存在显著地相关性。可以通过测定转lux基因的大肠杆菌发光强度判断大肠杆菌的数量,就可以测定转lux基因的大肠杆菌研究在贮藏过程中的大肠杆菌的消长变化;还可以检测药品的杀菌效果研究,杀菌效果就可以通过检测lux基因病原菌在小鼠体内的发光强度衡量和检测小鼠生理状况变化来检测;可以检测食品安全性能,食品某些物质对微生物DNA的伤害;同时进一步检测动植物体内有益菌。

GFP与lux的最大区别就是,GFP需要紫外激发,lux黑暗条件即可看到荧光。GFP是单一一个蛋白。而lux是多个蛋白构成的一个生化反应过程。

该基因来自发光嗜线虫致病杆菌 Xenorhabdus luminescens,K122。
相关文献:
Molecular Cloning and Characterization of the lux Genes from the Secondary form of Xenorhabdus luminescens,K122

Molecular Cloning andCharacterization of the.pdf
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本实验使用的质粒就是文中构建的pL1217,是一个作者构建基因文库筛选到的具有发光能力的转化。包含lux基因的5个ORF。约10.5kb。
123.jpg

感受态制备,转化,培养。均与前作基本相同。

以下是lux的发光效果。
开灯情况。
1.jpg

关灯。曝光3s
  
2.jpg

关灯。曝光8s
3.jpg


对比GFP
23.jpg


自发荧光很好玩的是,你摇一摇瓶子,立马就整个瓶子变得幽绿幽绿的。静置十几秒就变暗了。感觉像一瓶子放射性元素似的。拿出来吓人不错。  
+19  科创币    巴哥的tc梦   2012-07-21   加油,植入小白鼠的受精卵后,正常情况下小鼠是荧光的吧
来自 生物学
2012-7-21 21:11:35
1楼
是钱永健他们研究GFP啊,我支持下
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2楼
加油,植入小白鼠的受精卵后,正常情况下小鼠是荧光的吧
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3楼
[s:275] LZ也不来点翻译,纯英文,不过划线的重点有助于阅读啊
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