自养、兼养、异养小球藻的扩培(教程更新)
GiroPetrenko2022/03/12农业 IP:江苏
中文摘要
小球藻作为一种单细胞水生藻类,具有丰富的蛋白质、脂肪、碳水化合物,可作为一种饲料添加剂使用。

------------- 教程分割线 -------------

(1)琼脂平板扩培

琼脂平板易于栽培,配置成斜面则可以进行保存。对于自然环境中提取的微藻,亦可以使用平板划线法分离藻群,此乃通用性较强的方法。

(GF-800C) 浓缩液配方

原料用量  (400mL)备注
尿素
10g

可采用KNO3 NaNO3(需计算总氮)

MgSO7H2O
3g七水
K2HPO43g
磷酸氢二钾 易混淆
KH2PO47g磷酸二氢钾 常见化肥

将上述原材料用蒸馏水定容至400mL。

取浓缩液10mL,稀释至1L,加入1.5%至3%的琼脂粉(视琼脂强度而定),煮沸。若要制作异养培养基,加入5-20g葡萄糖,121°C蒸汽灭菌20分钟,倒入平板中。


注:由于添加了糖类,异养过程中液体培养基容易染菌。对于琼脂平板而言,可以使用高压蒸汽灭菌等生物实验方法灭除培养基内的杂菌。但在有曝气需求的中小型液体扩培装置中,其很难保证内外环境的隔离,从而使得小球藻遭受污染;因此在生产环境中大多使用自养模式(而且葡萄糖很贵啊喂)。

IMG_20220327_170611.jpg

涂布平板,用parafilm(平替:医用透气胶带)封口。光照条件3000-8000lux,50%光暗比(自然光照也行,避免阳光暴晒),等待三天后采收藻种。

(2)液体培养基扩培

采收后,用接种环挑出单个藻落(购买的商业藻种一般较纯,虽然不保证无菌,但是品种一致性好),接种至100mL液体培养基中,配方同上。有条件的使用摇床,避免沉积;待藻类再次富集时,可转移至更大型的容器内。对于1L的锥形瓶,可以使用简易隔膜泵进行曝气。

2NOR(6_SH7S@OJ95K4E@FUC.jpg

(取50mL藻种(左),加入900mL培养基(右))

2G[K}D6YY~3G7W7[KFI1QYT.jpg

(室内自然光照,曝气与光照同步,五天后)


---------------- 原文章存档 -------------------


小球藻既可以进行自养栽培(CO2作为碳源,光合作用),也可以进行异养栽培(利用外来碳源 - 例如单糖)。规模化培育设备一般采用管式光生物反应器,流动水池等等;在实验室中一般采用锥形瓶作为培养容器。

采用的微藻培养基配方如下:

名称用量 (g/L)备注
葡萄糖20食品级
KNO3
1.5化肥级
KH2PO4
1.5化肥级

IMG_20220311_202353.jpg

小球藻采用网购鱼塘级冻干粉,用蒸馏水稀释至1%后避光保存。

取100mL培养基倒入锥形瓶,微波灭菌,待冷却至室温后加入1mL小球藻稀释液。

IMG_20220312_105304.jpg

最左边这瓶有5%的小球藻稀释液,所以看起来比较绿。其他三瓶都是标准的1%;


------------- 参考文献区 -------------


attachment icon 有机碳源对异养小球藻生长、蛋白质和叶绿素含量的影响_梁长利.pdf 1.20MB PDF 188次下载 预览

attachment icon 单糖对小球藻生长影响的初步研究.pdf 13.81MB PDF 170次下载 预览


[修改于 2年2个月前 - 2022/03/30 18:38:15]

来自:农林牧渔 / 农业动手实践:实验报导
17
6
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~~空空如也
全桥整流
2年2个月前 IP:广东
902156

突然想起了那位小球藻老哥。躺平吧的一代传奇。


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GiroPetrenko作者
2年2个月前 IP:江苏
902163

第一批全部被晒死了。

重来!

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氟氩化氢
2年2个月前 IP:中国
902166
引用GiroPetrenko发表于2楼的内容
第一批全部被晒死了。重来!

养了一天就没了?😨

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BI4LNE
2年2个月前 IP:山东
902172

水温太高烫死了么

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GiroPetrenko作者
2年2个月前 IP:江苏
902215

07D45E214F57A16EE7C9866CA2CB2227.jpg

制作了一批固态培养基,配方同上,只是加入了2%的琼脂。

image.png

据这篇专利所述,应该要等待几天才能长成菌落(藻落?)

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200361095
2年2个月前 IP:北京
902216
引用BI4LNE发表于4楼的内容
水温太高烫死了么

这才3月,,应该不至于太烫吧,弄不好是紫外线~~

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GiroPetrenko作者
2年2个月前 IP:江苏
902263

好像冻干粉是没法扩培的。。。

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gjgh
2年2个月前 IP:浙江
902271
引用GiroPetrenko发表于7楼的内容
好像冻干粉是没法扩培的。。。

大概冻干粉是死细胞,只是拿来喂鱼的

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GiroPetrenko作者
2年2个月前 IP:江苏
902316

IMG_20220319_164456.jpg IMG_20220319_164851.jpg

新的小球藻到了,先涂个平板。上一批的平板(毫无意外地)什么也没有。

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GiroPetrenko作者
2年2个月前 IP:江苏
902325

image.png

物镜x10

3{L{H{$`WTK_MEP]PYKA2DB.jpg

物镜x40

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GiroPetrenko作者
2年2个月前 IP:江苏
902426


77DF40A1F0F4D7CDEC6C4121A55C272E.jpg

左边三瓶是昨晚制作的,右边三瓶是三天前培育的,好像的确绿一些(?)

image.png

取最绿的一瓶(从左往右数第四)涂片;10x物镜,未染色。

K61FS_QQ)Z}Z])LU0OX~~52.jpg

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GiroPetrenko作者
2年2个月前 IP:江苏
902497

E9AGO8YZ(CSU7{$OE@ON]_X.jpg

五天前涂布的平板,已经长出了大肠杆菌,看来是没法用了。

(家庭条件下灭菌是个难题)

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GiroPetrenko作者
2年2个月前 IP:江苏
902626

2022/03/27: 更新了一部分教程。

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BI4LNE
2年2个月前 IP:山东
902656

加点抗生素到培养基里说不定行?

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songzhaoyun
2年0个月前 IP:北京
904549

我拿-80保的藻划的TAP平板,27℃,24/0光周期,光照40%,培养了4d,没有藻落长出来,同时划的蓝细菌(BG11板子)也没长出来,这咋回事啊,求教大神


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yyt6200
1年10个月前 IP:江苏
905777

大佬,请教下,液体培养基部分900ML是浓缩液900ML?还是取10ML浓缩液稀释到1L后的900ML稀释液?

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sunruikang
1年5个月前 IP:山东
911742

请问渔业用的小球藻/螺旋藻粉末是活菌吗?能不能用作种子?

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