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生物防治用地衣、枯草芽孢杆菌固体菌粉的制备(教程向)
中文摘要
地衣芽孢杆菌是一种益生菌,无明显毒理作用,且可以形成芽孢,适合做入门级别的微生物研究。本文以取自OTC药物“整肠生”中的地衣芽孢杆菌为菌种,利用液体、固体培养基进行了简单的培育实验,并制成菌粉。

材料准备

名称单位备注
100mL 锥形瓶
5 (只)窄口
250mL 锥形瓶
1 (只)固体培养基灭菌,宽口
90mm 一次性培养皿
10(套)EO灭菌
移液枪1 (把)100uL - 1mL

配方

营养琼脂 No.2 [NA(II)]用量 (g/L)备注 
蛋白胨
15
酵母浸粉3.0
葡萄糖(无水)
1
氯化钠6
琼脂粉
15液体培养基不包括琼脂


发酵优化培养基(精细) [(F)BL-II]用量 (g/L)备注 
大豆蛋白胨
5
硫酸锰(一水)0.5
葡萄糖(无水)
10
NaCl
4.5


发酵优化培养基(粗加工) [(F)BL-I]用量 (g/L)备注 
黄豆粉 / 玉米粉~15需重新计算总氮、总碳
红糖~5经验值,批次差异较大

前期准备

> 准备5个营养琼脂平板,然后将菌粉(或琼脂斜面)活化后涂板。

IMG_0125.jpg

(枯草芽孢杆菌的典型菌落)

制备营养肉汤(也就是不加琼脂的营养琼脂),121°C高压灭菌10分钟,待冷却后接种单菌落一环;37°C培养24小时,有条件应使用摇床。培育后即得可用的菌液,剩余部分应放入4°C冰箱保存。


方法一(固体培养基)

100mL锥形瓶装入25mL发酵优化培养基(固体),加入少许菌液覆盖琼脂表面,37°C培养48小时。

2799C67E14BB5ED4D92D18954525D5E5.png

培养基表面覆盖着一层厚厚的菌苔,用适量生理盐水洗下,准备制成菌粉。

方法二(液体培养基)

100mL锥形瓶装入25mL发酵优化培养基(液体),接种5%的菌液,摇瓶发酵48小时。用此种方法活菌数可达1x109/mL量级(不精确,因为移液枪还在路上)

吸附方法

(1)按照菌液:蒙脱石散1:3混匀,60°C烤箱干燥至恒重。优点:制剂较为纯净,可以达到食品级;缺点:成本很高

(2)按照菌液:淀粉1:5混匀,40°C干燥(不可高温,淀粉会糊化)。优点:很便宜,也比较纯净;缺点:活菌数低

(3)按照菌液:玉米芯粉(60~80目)1:1混匀,60°C干燥。优点:成本低,干燥快;缺点:杂质多,适合农田生防



主要参考这篇专利:

attachment icon 地衣芽孢杆菌生态制剂的制备方法.pdf 337.13KB PDF 22次下载 预览

attachment icon 地衣芽孢杆菌 CHB6 高芽孢形成率.pdf 267.80KB PDF 10次下载 预览


[修改于 3个月23天前 - 2022/04/22 19:49:57]

来自:生物医药 / 生物学动手实践:实验报导严肃内容:教程/课程
6
2SC1970
4个月3天前
1楼

冷却时开着紫外线灯会不会导致菌体突变什么的

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苯宝宝正辛酸
4个月3天前
2楼

楼主转行了呀 sticker

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GiroPetrenko作者
4个月2天前
3楼

IMG_0078.jpg

菌粉成品图片,大概还是需要研磨的。

IMG_0081.jpg

取少许菌粉涂板。好像落入杂菌了。。。

(应该稀释后涂布,这样可以计数)

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GiroPetrenko作者
3个月23天前
4楼

2022/04/22:更新为教程格式。

下一篇估计做玉米芯粉+纤维素酶酿酒(玉米芯粉买多了)

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苯宝宝正辛酸
3个月22天前 修改于 3个月22天前
5楼

楼主不搞点penicillin的制备试试,受楼主影响和亿点点买药期间的小刺激,我开始培养了,我现在在捂橘子皮,等着烂

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WernerPleischner
3个月22天前
6楼
引用苯宝宝正辛酸发表于5楼的内容
楼主不搞点penicillin的制备试试,受楼主影响和亿点点买药期间的小刺激,我开始培养了,我现在在...

自撰一良方,服之,卒。

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