前言

      革兰氏染色法（Gram Staining）是一种极其重要的鉴别染色法，这一染色方法由丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰（C. Gram）于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系，后推广为鉴别细菌种类的重要特性之一，其原理主要与细菌的细胞壁（cytodrm）有关。

                       原理简介

         革兰氏染色法先用结晶紫初染和碘液媒染，形成不溶于水的紫色复合物，然后再用乙醇脱色，最后用沙黄等红色染料（也可称作复红）复染，由于革兰氏阳性菌细胞壁的特点是厚度大（20～80nm），且化学组分简单，他一般只含有90%肽聚糖和10%磷壁酸，遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，且它不含类脂，乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在细胞壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌的细胞壁层次多，厚度低，且化学成分复杂，遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，松散的肽聚糖网不能阻挡复合物的溢出，通过乙醇脱色后无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色；因此，在普通光学显微镜下，就可以根据颜色来区分革兰氏阴性菌（Gram negative bacteria，G-）和革兰氏阳性（Gram positive bacteria，G+）菌。                            

               图1-1 革兰氏阳性菌

              图1-2 革兰氏阳性菌

                   具体操作方法

        革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤：①涂片固定。②草酸铵结晶紫染1分钟。③蒸馏水冲洗。④滴加碘液覆盖涂面染约1分钟。⑤清水洗后用吸水纸吸去水分。⑥加95%酒精（或丙酮）数滴，30秒后水洗。⑦复红染色液染1分钟后，清水冲洗。用吸水纸干燥后镜检既可。

       在显微镜下，细菌颜色呈紫色，作为革兰氏阳性菌；而细菌呈红色，作为革兰氏阴性菌。

   图 2-1 血琼脂平板培养的巴氏杆菌

                      参考文献

【1】沈萍，陈向东.微生物学.3版.北京：高等教育出版社，2016

【2】朱秀诛，蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册.北京：科学出版社，2012

【3】Baker S， et al.微生物学，5版.沈萍，彭珍，主译.北京：高等教育出版社，2003