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对马铃薯培养基的尝试改良(慢更)

新人报道,希望各路大佬多多关照!

马铃薯葡萄糖琼脂培养基,简称PDA培养基,是实验室常用于培养真菌的培养基,也是实验党制作难度最低的一种培养基,上可养青霉曲霉,下可养酵母细菌,反正灭菌不充分什么牛鬼蛇神都能在板子上冒出来😥

本人前一段时间在研究黄曲霉毒素的破坏实验,耗费了很长一段时间从自然界选种黄曲霉(尽管还是没有找到菌株……)。其中遇到了这样一个问题:采样的孢子样本中酵母菌生长速度远快于霉菌,因此总是在霉菌之前形成优势菌群,减慢甚至抑制霉菌的繁殖 IMG_20211106_115412.jpg (一个月前的板子,培养基已经干了……)

在结合了高盐察氏培养基的思路后,我尝试在培养基添加60g/L的氯化钠用来抑制杂菌特别是酵母的繁殖。由于我没有找到关于酵母耐盐性的文献,所以这次算是一个测试吧

IMG_20211106_120004.jpg

高盐察氏培养基配方,提供了本次改良培养基的思路。

本人改良的配置配方如下(1L用量):

(顺便说一下普通PDA的制作【笑】)

200g土豆洗净削皮,煮至软烂,过滤,加入20g葡萄糖(可以用蔗糖代替),15~20g琼脂(根据琼脂强度增减用量),60g氯化钠,加热至完全溶解,高压灭菌15min。

这里备注一下,一些朋友会用食品级琼脂,这种琼脂强度较低且凝固点高,可以增加用量(本人测试时最大用到过40g/L,数据可供参考),凝固点约60度,灭菌后需要很快倒板,我当时被烫了好几次……

用的是一次性灭菌塑料平板,500ml培养基倒了20个板子,实验级琼脂还在路上所以先用食品级琼脂(严重怀疑这是卡拉胶)代替了,稍微冷却后在板子上加入硫酸庆大霉素作为抗菌剂(正确操作是加入到冷却至约40度的培养基中,但食品级琼脂凝固点太高,只能这么办),用量是2支/L,每支8万单位,兽药很便宜。

IMG_20211106_121530.jpg

接种使用的是组培污染苗生长的绿色的某种霉菌孢子悬液(我认不出来是哪种,求助大佬……),每个皿200微升,恒温箱28度培养。我们这边天冷了,放外边怕半个月都没啥动静……

然后这是两周后的结果,长势良好,霉菌生长没有被高浓度氯化钠抑制,没有酵母和细菌菌落。下一阶段是测试对酵母菌和对耐盐菌(金葡菌)的抑制。

IMG_20211106_124121.jpg

来自:生物医药 / 生物学动手实践:实验报导严肃内容:教程/课程
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言云明 作者
2个月17天前
1楼

至于抗菌剂的选择,除了自带较高浓度的氯化钠,我打算使用三抗,也就是青霉素-氯霉素-庆大霉素联合用药(我们联合!),希望能杀灭残余的革兰阳性菌,特别是烦人的金葡菌。

前面忘了说PH,调节至弱酸性就好,和PDA标准一样。

这个改良培养基我觉得最大的意义吧,在于选种时尽可能减少天然样本的杂菌污染(毕竟天然样本必定是菌种大杂烩),减少后期分离负担。然后,高盐的特性也可能有利于更好保存。

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westwarded
2个月15天前
2楼
引用言云明发表于1楼的内容
至于抗菌剂的选择,除了自带较高浓度的氯化钠,我打算使用三抗,也就是青霉素-氯霉素-庆大霉素联合用药(...

试一下乳酸链球菌素。

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caCO2
2个月3天前
3楼

看大佬

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