亲手教大家提取DNA(绝对原创)
本人昨天经历过无数次失败后(台湾那位仁兄阿简的误导)
今天,在WarMonky给予资料的前提下,终于成功萃取了DNA!
首先,我要感谢WarMonky,其次,我要对昨天因失误而叶子被几乎摘光的的桃树盆景表示歉意。

教程如下
材料
萃取出DNA的材料(我这里用香蕉)
肥皂
食盐

小勺
透明碗
75%酒精


方法
1上榨汁机,将香蕉榨成浆。
S6002852.JPG
S6002853.JPG   
加入少许食盐,继续榨汁
使用食盐的是为了让DNA片段能聚在一起形成黏稠的物质,因为DNA链上的磷酸根略帶负电荷,而盐离子可被吸引到DNA的负电荷上,中和这些负电荷。
S6002854.JPG   
用裤袜过滤
S6002855.JPG   
   S6002856.JPG

2配置肥皂水
肥皂+热水 等待5分钟
S6002858.JPG
就OK了

3将过滤好的香蕉浆加入肥皂水
S6002859.JPG
轻轻摇动,充分混合,不要弄出太大的泡沫就可以了。
S6002860.JPG
彻底混合均匀
+150  科创币    花心大萝卜   2009-03-22    用于试验鼓励!
+1000  科创币    虎哥   2009-03-22    鼓励发实验,望增加理论 ..
来自:农林牧渔 / 农业
 
1
神箭凌霄 作者
12年4个月前
1楼
加入与混合液等量的75%酒精,因为DNA不溶于酒精,可用酒精将其析出
S6002861.JPG   混合液
S6002862.JPG 酒精

沉淀5min
里面的絮状物就是DNA了
S6002866.JPG
S6002864.JPG   


装瓶
S6002872.JPG
+1100
科创币
海豚
2009-03-22
500KCB为博物版发贴政策 ..
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huzhoulxm
12年4个月前
2楼
完了??少发?
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huzhoulxm
12年4个月前
3楼
楼上的,竟然被你快了0.001秒?
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用户已注销
12年4个月前
4楼
鼓励原创实验,加KCB2000,暂且记账,4月3日兑现.
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shuimi126
12年4个月前
5楼
快来看啊!有人自己对自己说话啊!!!!!!!
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用户已注销
12年4个月前
6楼
另外问一下,这DNA还有生物活性吗?
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AnthraX
12年4个月前
7楼
楼主的榨汁机看上去和我的一样
PS:顶丝袜……
PS2:DNA的样子很邪恶,看上去好像某男性体液在水中的样子……
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ironblossom
12年4个月前
8楼
严重怀疑做出来的是不是DNA。因为蛋白质也是会析出的。楼主考虑一下...
P.S.2,3楼属帕金森综合症前兆。
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AnthraX
12年4个月前
9楼
2,3楼是精神分裂的中期症状了
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warmonkey
12年4个月前
10楼
可以用蛋白酶处理一下看看。
绝对是DNA,至少大部分是。
而且在加盐的时候,蛋白质就有一部分析出了
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用户已注销
12年4个月前
11楼
话说那2000KCB你们两个怎么分请自行商量,最后把结果回复在本贴即可.
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tRNA
12年4个月前
12楼
感觉还是不大靠谱。。。

第一,加盐怎么控制?RNA和DNA在不同盐浓度溶液溶解性不同,我猜LZ这个可能DNA、RNA,研磨没在低温下进行,核酸酶还有一定活性,所以水解物都可能有。

第二,肥皂可以起到去污剂法提取DNA中SDS的作用,但效果肯定没有SDS强,所以被DNA缠绕的组蛋白肯定有残留。

第三,香蕉内多糖含量也很高,不排除水溶性多糖夹杂在产物里。

第四,这种粗磨的方法不能让DNA变成片断,所以怀疑你提的是染色丝。

第五,“萃取”是指“液-液萃取”,即两相都是液态,LZ的实验更像纯化而不是萃取。
+10
科创币
花心大萝卜
2009-03-22
精辟,观点鲜明!论点充 ..
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用户已注销
12年4个月前
13楼
H图说的有道理...不过貌似以前高中的教科书上也说提取出来的是DNA...貌似是用鸡血为原料提取的...
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tRNA
12年4个月前
14楼
不好意思,我和贵站的“H图”不是一个人,只是他要我做化吧到KC的外交官……

高中的教科书上的实验原理就是控制氯化钠的浓度来溶解DNP,不再纯化成DNA。大学生化或分子生物学课程用的方法通常是碱裂解法,即用碱溶液破坏质膜核膜,再用SDS除去组蛋白;另外还有微柱法,即用试剂盒纯化,效果更好。
+10
科创币
花心大萝卜
2009-03-23
建议合理
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warmonkey
12年4个月前
15楼
这个方法得到的DNA,纯度已经比原材料高多了,所以说是粗提取
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tRNA
12年4个月前
16楼
可问题是,我怀疑这里边什么都有——DNA、RNA、DNP、RNP、多糖、维生素、蛋白……

跟没提有什么区别?
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warmonkey
12年4个月前
17楼
浓度高了很多

无论怎么提纯,你说的物质肯定还是有的,只是多少问题而已
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tRNA
12年4个月前
18楼
好吧好吧,就按你的思路,提出来的DNA浓度是比原来在植物体内的多。但是把这个思路放在别的物质上来考虑(如上边列举的,除DNA外的物质),浓度也是比在原植物体内的多。

我觉得吧,这个实验只是将实验材料里的一些物质(是一些物质不是一种物质)用水溶醇沉法分离出来,仅仅提到DNA就没有意义,有点以偏概全的味道了。


说个题外话,幸好中学生物课用的材料是鸡血,如果是猪血估计就提不了多少东西出来了。。。LZ用二苯胺检验一下看看吧,有条件的话做个紫外吸收测含量?
+1000
科创币
科创网
2009-03-24
累计加分
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warmonkey
12年4个月前
19楼
我也是这么想的,用二苯胺检验一下,就知道了

还有,我有紫外光源,可以使RMB上的荧光标志发光,还有照度计,怎么做”紫外吸收测含量“呢?
+1000
科创币
彼岸江山
2009-03-25
原創獎勵
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tRNA
12年4个月前
20楼
DNA在260nm处有最大吸收值,先用DNA标准品画出标准吸收曲线,再测出样品的吸收值,代入回归方程算出浓度。还可以把波长调到280nm,用同样的方法,以考马斯亮蓝为标记物测测样品中蛋白含量。

你的紫外光源应该是近紫外区的,远不能达到260nm。
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warmonkey
12年4个月前
21楼
算了,没有标准DNA样品,也不知道那个方程……
光源是氮化镓二极管
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真蚊子
12年4个月前
22楼
呃,很多年前【我小学的时候,大概四五年前吧...】,我看过一本科普教育书【好像是小哥白尼】,里面就有这种提取DNA的方法....
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bull333
12年4个月前
23楼
长见识了
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用户已注销
12年4个月前
24楼
哦?为什么鸡血可以提取到而猪血提取不了?
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bighead
12年4个月前
25楼
回楼上


鸡血是鸟类动物的血液 其成熟红细胞有细胞核

猪是哺乳动物 成熟红细胞没有细胞核

-------------
鉴定 DNA 可以用 二苯胺 水浴加热  变蓝色 说明有DNA
高二下册 人教版 的一个实验

-----------
一个问题 家肥皂水的作用是什么? O(∩_∩)O谢谢
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一只羊
12年4个月前
26楼
[s:253]  [s:255]  [s:258]  [s:251]
非常好!继续加油!欢迎原创! [s:92]
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苯萘蒽菲
12年4个月前
27楼
加一些龙胆紫,看能不能染色
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神箭凌霄作者
12年4个月前
28楼
加甲基蓝可以染色
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tRNA
12年3个月前
29楼
引用第25楼bighead于2009-04-10 18:09发表的  :
鸡血是鸟类动物的血液 其成熟红细胞有细胞核
猪是哺乳动物 成熟红细胞没有细胞核

正解,猪血里也能提一点,从白细胞里提,那点实在太少太少了,提出来再做个PCR还差不多
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ueaor
12年0个月前
30楼
以前在网上看过一种是用乙酸钾和异丙醇来提取DNA的
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我真的是人渣
11年7个月前
31楼
截至30L,都是非专业...
我就一句话,细胞破碎了没?没破的哪来核物质?
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baozuyi
11年5个月前
32楼
我有个问题
DNA溶于水吗?如果溶的话  装瓶的时候为什么没有溶解? [s:246]
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baozuyi
11年5个月前
33楼
难道是酒精。。。
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jhs1229
11年5个月前
34楼
DNA可溶于0.14mol/l的氯化钠,不溶于酒精,这个只是粗提,里面杂质很多
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baozuyi
11年5个月前
35楼
3Q问一下 DNA溶于水吗?溶于盐溶液吗?  网上查 说在0.14mol/l的氯化钠溶液中溶解度最小
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彼岸江山
11年5个月前
36楼
引用第35楼baozuyi于2010-03-14 09:38发表的  :
3Q问一下 DNA溶于水吗?溶于盐溶液吗?  网上查 说在0.14mol/l的氯化钠溶液中溶解度最小

溶啊……这个问题高中课本中都有答案……
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jrcsh
11年5个月前
37楼
用裤袜过滤
~~~~~~~~~~~~作者~~~女的
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baozuyi
11年5个月前
38楼
我还没学到。。。
我现在做出了粗残品  已用龙胆紫染色过了 可以染
现在想用二苯胺 检验
现在只有二苯胺  不知道可不可以检验
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baozuyi
11年5个月前
39楼
因为配制二苯胺试剂要浓硫酸  实在弄不到
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zxyso4
11年3个月前
40楼
楼主……你直接在你刚配好的浓肥皂水里加75%乙醇也能得到这东西…………
我知道里面有DNA,但大部分应该是肥皂凝胶……
DNA可不是这样的……上高中生物课你没提过么???
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小皮斯笨蛋
9年10个月前
41楼
香蕉DNA能做啥,合体吧
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乖乖乖
9年10个月前
42楼
提示一点,提取DNA用的是冷酒精,就是在冰箱冷冻室冻过24小时的酒精,因为DNA在冷酒精中的溶解度最低,可以最大限度减少损失
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twz562
10个月18天前
43楼

感觉洗洁精比肥皂水可能会好一些,这个至少是透明的

过滤后的滤液应该是将氯化钠浓度稀释到0.14mol/L,可以析出DNA粗品

DNA用浓氯化钠溶液溶解,然后加冷酒精,析出DNA纯品

检验用二苯胺试剂,估计吖啶橙或溴化乙锭也行,但后两者有较高的毒性,可引起基因突变(致癌)


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MayDay11neo73
10个月17天前
44楼

唾液,人血应该可以代替香蕉液吧

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Lihua
10个月17天前
45楼
引用MayDay11neo73发表于44楼的内容
唾液,人血应该可以代替香蕉液吧

唾液应该不行。人血不太好,哺乳动物的成熟红细胞没有细胞核,没有DNA。白细胞等有DNA,但是数量太少。

建议用鸡血。


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