一、实验目的

1.学习色谱柱的制备。

2.学习用柱色谱分离、提纯化合物的操作

3.学习从天然产物中提取有机化合物的实验技术

二、实验原理^[1]

绿色植物的茎、叶中含有胡萝卜素、叶黄素和叶绿素等色素。

胡萝卜素（C40H56）有三种异构体，即α-、β-和γ-胡萝卜素。其中β-体含量较多，也最重要。β-体具有维生素A的生理活性，其结构是两分子的维生素A在链端失去两分子水结合而成的，在生物体内β-体受酶催化氧化即形成维生素A。目前β-体亦可工业生产，可作为维生素A使用，同时也作为食品工业中的色素。

叶黄素（C40H56O2）最早是从蛋黄中分离。

叶绿素有两个异构体：叶绿素a，C55H72MgN4O5；叶绿素b，C55H70MgN4O6。它们都是吡咯衍生物与金属镁的配合物，是植物光合作用所必需的催化剂。在柱色谱中，两者由于吸附能力不同，从而得到分离。

三、药品和仪器

药品：5.0 g绿色植物叶，95%乙醇，石油醚（30-60℃），乙酸乙酯，碳酸钙，石英砂，饱和氯化钠溶液。

仪器：研钵、漏斗、无纺布、烧杯、分液漏斗、量筒、玻璃色谱柱、滤纸片、样品瓶、气泵。

四、实验步骤

取约100 cm3柱层析硅胶加热活化。

取5.0 g新鲜的绿色植物叶子于研钵中，加入10 mL EtOH、少许碳酸钙和石英砂研碎。快速用无纺布过滤。滤液转移至分液漏斗，倒入10 mL PE作萃取剂，加入5 mL饱和氯化钠溶液防止乳化。振摇，静置，分出有机相。

分液前

根据PE:EA:EtOH=85:10:5（体积）的比例配制洗脱液。

向活化后的硅胶中倒入100 mL洗脱液，搅拌成均匀的糊状，倒入柱中。

硅胶顶部放一片滤纸片保护硅胶柱，再补加一些洗脱液。打开活塞，使液面降至硅胶顶端。

沿柱内壁缓缓加入光合色素的PE溶液。

打开活塞，使液面降至硅胶顶端。用气泵略加压。随后补加洗脱液。一段时间后光合色素被分离。

继续洗脱，用样品瓶依次接收不同产物。其中叶黄素没有收集到，因为洗脱液用完了。